二硝基氟苯（FDNB）衍生法

来源：www.bio-sensor1.org 发布时间：2014-11-27

FDNB与氨基酸的衍生反应条件易于控制，而且其衍生产物2,4-硝基苯氨基酸有很好的稳定性，4℃下避光保存一个月后响应值无明显变化，这给定量测定带来了很大的方便。该反应生成的衍生物由于硝基苯环的引入，可产生较强的紫外吸收，检测灵敏度可达pmol水平；此外，该衍生物色谱分离时间较短，分析结果的准确性、重复性均较好。由于FDNB与氨基结合牢固，该衍生产物相当稳定，是进行氨基酸柱前衍生的理想试剂。

该方法的主要缺点是衍生化反应副产物二硝基苯酚与主要衍生物的保留时间相近，会对分离过程造成干扰，解决办法为控制衍生试剂FDNB的加入量和改善分离条件。
　　CDNB有与FDNB类似的硝基苯基团，因此其柱前衍生和色谱分析条件与FDNB法类似，易得、理化性质稳定、制备试样方便简单等特点。已有报道采用C18柱和乙腈-醋酸盐缓冲体系梯度洗脱方法，可将17种混合氨基酸及衍生剂水解物进行有效分离。
　　此方法衍生后的氨基酸一般在键合C18柱上，根据液液分配原理进行分离。色谱流动相多以乙酸盐或磷酸盐缓冲液为主，以乙腈、甲醇或四氢呋喃为调节剂。由于该氨基酸衍生物仍保留着两性化合物的特点，故除改变调节剂之外，还可通过调节缓冲液pH值、离子强度、柱温等使之达到理想的分离。当然，不同衍生物所选用的柱型、流动相以及氨基酸的洗脱时间和顺序不尽相同。该方法可用于分析蛋白质水解液、生理体液和食品等样品中的氨基酸。

上一条: 生物传感分析仪的结构研究

下一条: 氨基酸衍生物的测定实验